問(wèn)題一、1.在15min內(nèi)*溶出的藥物需要做溶出曲線嗎？

2.如果參比制劑在0.1mol/l鹽酸中很容易分解，還需要對(duì)酸性介質(zhì)進(jìn)行研究嘛？做溶出介質(zhì)的目的主要是選擇的溶出介質(zhì)還是模擬體內(nèi)，考察樣品的溶解情況？
3.溶出度研究，做6粒行不行？

謝老師：

(1)需要。但僅做5、10、15和30分鐘即可，因15分鐘和30分鐘已至平臺(tái)區(qū)。
(2)在測(cè)定原料藥在各溶出介質(zhì)中的溶解度和穩(wěn)定性時(shí)，如發(fā)現(xiàn)在某一介質(zhì)中不穩(wěn)定，可依據(jù)不穩(wěn)定性程度（即降解速率），酌情考慮測(cè)定辦法，如：

立即進(jìn)樣；

使主成分全部轉(zhuǎn)變成該“物質(zhì)”后測(cè)定含量，再推導(dǎo)出主成分溶出量（需知兩者的轉(zhuǎn)換系數(shù)）；

通過(guò)HPLC法將兩者分離，分別測(cè)定。將“轉(zhuǎn)變物”換算成主成分，仍以主成分計(jì)算出溶出量。

(4)測(cè)定溶出曲線有很多作用和目的，不僅是為了建立體內(nèi)外相關(guān)性，更為重要的是采用這樣一種手段來(lái)“剖析”和“肢解”固體制劑內(nèi)在品質(zhì)！

(5)眾多法規(guī)上均要求做12粒，是從統(tǒng)計(jì)學(xué)角度出發(fā)，當(dāng)生產(chǎn)規(guī)模達(dá)幾十萬(wàn)片、甚至幾百萬(wàn)片時(shí)的考慮。而就目前國(guó)內(nèi)實(shí)際生產(chǎn)情況，無(wú)論是在研發(fā)階段和質(zhì)量評(píng)估階段皆可采用6片，其測(cè)定數(shù)據(jù)已基本被認(rèn)為具有代表性了。 

問(wèn)題二、復(fù)方制劑，其中一個(gè)API為酸性（pKa4.5-6.0），另一個(gè)API的pKa6.5-8.5，是分別制粒后壓制成片劑，請(qǐng)問(wèn)它們應(yīng)該做哪些溶出介質(zhì)呢？

謝老師：
(1)首先分別進(jìn)行兩物質(zhì)在不同溶出介質(zhì)的溶解度測(cè)定，觀測(cè)pH值-溶解度曲線圖在縱坐標(biāo)4.5~8.0間的情況（是否較為“陡峭”）。
(2)如平坦、采用通常的四種介質(zhì)進(jìn)行研究皆可；如陡峭，建議增加“在4.5~8.0間，每隔0.5間隔”的多溶出介質(zhì)研究，然后根據(jù)實(shí)際測(cè)定情況，擬定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的溶出介質(zhì)。

問(wèn)題三、有個(gè)問(wèn)題請(qǐng)教，看到你寫的“溶出曲線的測(cè)定與比較”中關(guān)于計(jì)算時(shí)間點(diǎn)的確定，說(shuō)調(diào)釋制劑溶出率80%以上的時(shí)間點(diǎn)應(yīng)不多于一個(gè)，調(diào)釋制劑選擇溶出率相近的4-6個(gè)時(shí)間點(diǎn)計(jì)算。也就是說(shuō)調(diào)釋制劑的相關(guān)系數(shù)f2只有這4-6個(gè)時(shí)間點(diǎn)就可以，沒(méi)有必要取10個(gè)或8個(gè)時(shí)間點(diǎn)，我這樣理解對(duì)嗎？

謝老師：

計(jì)算f2因子時(shí)，n值的貢獻(xiàn)比較大，會(huì)出現(xiàn)n值較大，計(jì)算結(jié)果錯(cuò)誤地偏高。故日本溶出度試驗(yàn)指導(dǎo)原則中明確規(guī)定n值不得大于6。建議嘗試一下，觀測(cè)結(jié)果跟n值的關(guān)系如何。

問(wèn)題四、我在做一個(gè)水溶性差的藥物的片劑，藥典上規(guī)定的溶出條件是：漿法，50轉(zhuǎn)，0.1mol/LHCl；現(xiàn)在我想做一個(gè)原料藥的溶出情況的對(duì)照，我采用的是上述條件，然后將適量原料藥直接放入介質(zhì)中，在不同時(shí)間點(diǎn)取樣來(lái)繪制溶出曲線。請(qǐng)問(wèn)通過(guò)這樣的試驗(yàn)?zāi)苷f(shuō)明原料藥在介質(zhì)中的溶出情況嗎？能跟我們做出來(lái)的片劑做對(duì)照嗎？如果不行，應(yīng)怎樣設(shè)計(jì)試驗(yàn)？

謝老師：

采用原料藥做出來(lái)的溶出曲線是不能夠與成品制劑進(jìn)行對(duì)比研究的。其測(cè)定通常有以下兩種用途：
(1)評(píng)價(jià)原料藥自身特性對(duì)溶出度的影響，如粒徑、晶型、顆粒形狀、比表面能等參數(shù)。
(2)評(píng)價(jià)不同制劑工藝/處方/輔料制成的中間體對(duì)于原料藥溶出的改善程度。通過(guò)對(duì)以上各參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化與篩選來(lái)為制劑研發(fā)奠定基礎(chǔ)。

問(wèn)題五、非那雄胺片的溶出度實(shí)驗(yàn)中分別對(duì)微孔濾膜0.45um、0.8um規(guī)格做了回收實(shí)驗(yàn)，在棄去初濾液10ml后，發(fā)現(xiàn)其回收率都低于98%。不符合要求，但是當(dāng)增加初濾液的體積到25ml時(shí)，回收率可以達(dá)到98%，但依然存在有一片或者兩片低于此值。當(dāng)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行到這里的時(shí)候，我有點(diǎn)不知所措了！是繼續(xù)對(duì)不同品規(guī)的濾膜做回收，還是改方法取離心沉淀的上清液作樣品液呢？ 

謝老師：

很高興看到您的提問(wèn)。關(guān)于這一問(wèn)題的原理我本人撰寫的“溶出度測(cè)定中應(yīng)注意的若干問(wèn)題”一文中“2.2 過(guò)濾時(shí)的損失”有詳細(xì)論述。此類小規(guī)格制劑、由于主成分經(jīng)微粉化處理后與濾膜間有一個(gè)吸附飽和過(guò)程，而該過(guò)程又會(huì)因不同品牌的濾膜有所差異，故即便驗(yàn)證了不同品牌的濾膜和初濾液棄去的體積數(shù)，也不敢保證實(shí)際測(cè)定時(shí)會(huì)遇到的各種復(fù)雜情況。因此建議采用“離心法處理”。對(duì)于該種處理的異議主要是“離心會(huì)導(dǎo)致取出液中的樣品繼續(xù)溶出的顧慮”，其實(shí)此概率存在的可能性是極其微小的，即便存在亦不會(huì)給實(shí)際測(cè)定結(jié)果帶來(lái)顯著性影響。如欲驗(yàn)證，可采用不同轉(zhuǎn)速和離心時(shí)間予以明辨，觀測(cè)其是否有不斷增加趨勢(shì)。介于以上考慮，故質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中擬定離心法的品種我在藥檢所看到過(guò)很多，故請(qǐng)放心采用！其實(shí)有更為“藝高人膽大”的作法：取出后靜置一段時(shí)間直接進(jìn)樣（省略了離心繁瑣步驟）！因?yàn)槿绱诵∫?guī)格制劑，取出后樣品中存在的輔料顆粒堵塞色譜柱的概率亦是極其微小的。我本人自行試驗(yàn)和在日本學(xué)習(xí)期間，皆曾如此操作過(guò)，幾百針過(guò)后皆平安無(wú)事，不信一試！

問(wèn)題六、我在做緩釋片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)于方法學(xué)驗(yàn)證中的“范圍”這一項(xiàng)有點(diǎn)疑惑。我對(duì)范圍驗(yàn)證都是做的限度濃度點(diǎn)的回收率試驗(yàn)，這樣做有時(shí)就和“準(zhǔn)確度”驗(yàn)證有部分重合，不知這樣做是否正確？還有一點(diǎn)，對(duì)于釋放度的方法學(xué)驗(yàn)證中“范圍”這一項(xiàng)的驗(yàn)證，方法驗(yàn)證技術(shù)指導(dǎo)原則中說(shuō)“對(duì)于釋放度，如規(guī)定限度范圍為，從1小時(shí)后為20％至24小時(shí)后為90％，則驗(yàn)證范圍應(yīng)為0～110％。” 對(duì)于下限0％，該采用什么方法進(jìn)行驗(yàn)證？我擬采用的方法（1）采用空白片，充分溶解于釋放介質(zhì)，測(cè)定釋放度（理論應(yīng)為0％），測(cè)定六個(gè)空白片樣品，報(bào)告數(shù)據(jù)及RSD。或者（2）棄去0％這一點(diǎn)，驗(yàn)證釋放度10％、60％、110％三個(gè)點(diǎn)，每個(gè)點(diǎn)做三個(gè)不同濃度的式樣，各測(cè)定3次，即測(cè)定9次，報(bào)告已知加入量的回收率（%)。不知這樣考慮是否正確，還是應(yīng)該采用其他方法。

謝老師：

其中所涉及的均為溶出度測(cè)定法的“方法學(xué)驗(yàn)證內(nèi)容”。我們有時(shí)往往把問(wèn)題復(fù)雜化，其實(shí)如下簡(jiǎn)便操作即可：
(1) 線性試驗(yàn)：在溶出量為10%~120%間設(shè)計(jì)5個(gè)點(diǎn)（如10%、20%、40%、80%和120%），驗(yàn)證相關(guān)系數(shù)大于0.999即可；當(dāng)然溶出曲線研究時(shí)，小溶出量大于10%。
(2) 精密度試驗(yàn)：將溶出量分別為10%、40%和100%三個(gè)濃度溶液，各測(cè)定5~6次，計(jì)算RSD，皆小于2.0%即可；
(3) 準(zhǔn)確度試驗(yàn)/回收率試驗(yàn)：取對(duì)照品配制成10%、20%、40%、80%和120%五個(gè)濃度溶液，其中皆分別加入溶出量為100%時(shí)對(duì)應(yīng)的輔料量，測(cè)定回收率，平均回收率在98.0%~102.0%即可。
(4)《方法驗(yàn)證技術(shù)指導(dǎo)原則》中所述“對(duì)于釋放度，如規(guī)定限度范圍為，從1小時(shí)后為20％至24小時(shí)后為90％，則驗(yàn)證范圍應(yīng)為0～110％”，太過(guò)于理論化與書本化了，勿“生搬硬套”！

問(wèn)題七、我們現(xiàn)在研制的一個(gè)片劑，主藥不溶于水，也不溶于0.1mol/L的鹽酸溶液。在這兩種介質(zhì)中溶出度很低，45分鐘達(dá)不到30％。而且在水和鹽酸溶液中加入表面活性劑后，溶出度還是很低，那么這種情況下，在水和鹽酸兩種溶出介質(zhì)中，怎么樣來(lái)進(jìn)行研制產(chǎn)品和原研品種的溶出度比較呢？

謝老師：

建議您詳細(xì)閱讀一下本人撰寫的“溶出曲線的測(cè)定與比較”一文，測(cè)定時(shí)間：在酸性介質(zhì)中2小時(shí)、在其他所有介質(zhì)中6小時(shí)。

放寬試驗(yàn)參數(shù)步驟：首先增加轉(zhuǎn)速至75轉(zhuǎn)/槳板法或120轉(zhuǎn)/轉(zhuǎn)籃法，再增加表面活性劑濃度直至3.0%，如仍未果，再增加轉(zhuǎn)速至100轉(zhuǎn)（皆采用槳板法，不再采用轉(zhuǎn)籃法）。評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)不是以45分鐘達(dá)70%計(jì)，而是以連續(xù)兩點(diǎn)溶出率均達(dá)90%以上、且差值在5%以內(nèi)時(shí)，試驗(yàn)則可提前結(jié)束。

如果質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中擬定取樣時(shí)間點(diǎn)為60分鐘或90分鐘，甚至120分鐘（日本就有很多品種如此擬定），這實(shí)則是要求更高！而我國(guó)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)絕大部分皆擬定為30分鐘或45分鐘，這是“要求太低的表現(xiàn)”！還望您深入理解為盼！ 

問(wèn)題八、我們做的一個(gè)片劑，素片做崩解時(shí)限16分鐘，按藥典要求，不合格。但是按標(biāo)準(zhǔn)檢查溶出度，30分鐘取樣溶出95%左右。按照藥典規(guī)定，做了溶出度檢查的樣品不再進(jìn)行崩解時(shí)限的檢查，是不是可以判定本品合格。 

謝老師：

的確有這樣品種：按照質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的溶出度試驗(yàn)合格，而崩解時(shí)限不合格。其實(shí)、這個(gè)現(xiàn)象是很正常的，只要搞清楚質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中何時(shí)應(yīng)擬定崩解時(shí)限、何時(shí)應(yīng)擬定溶出度檢查后（請(qǐng)參照本貼中之前的回復(fù)以及所上傳的文章內(nèi)容）即可迎刃而解了……本品*可判定為“合格”！

問(wèn)題九、關(guān)于溶出延遲現(xiàn)象解釋，我有點(diǎn)疑問(wèn)：

（1） 為什么要對(duì)有這種現(xiàn)象的片子進(jìn)行校正后才能比較呢？不校正就不可以比較嗎？

謝老師：

經(jīng)查《日本仿制藥生物等效性試驗(yàn)指導(dǎo)原則——疑難解答》中如此表述：當(dāng)參比制劑有溶出延遲滯后現(xiàn)象時(shí)，不一定必須對(duì)溶出曲線采用延遲時(shí)間校正后再行比較，直接比較亦是可以的。但前提是仿制制劑與參比制劑的延遲滯后時(shí)間差必須在10分鐘以內(nèi)。
【注】由于日本仿制藥眾多、故日本厚生省藥品管理局陸續(xù)出臺(tái)了  《仿制藥生物等效性試驗(yàn)指導(dǎo)原則（主要針對(duì)固體制劑、其中有詳盡的溶出度研究方法）》、  《含量規(guī)格不同的口服固體制劑生物等效性試驗(yàn)指導(dǎo)原則》、  《口服固體制劑處方變更（含其他變更）后生物等效性試驗(yàn)指導(dǎo)原則》、《固體制劑改變劑型后生物等效性試驗(yàn)指導(dǎo)原則》，以及這些指導(dǎo)原則的《疑難解答》。本人于去年上半年翻譯了以上所有內(nèi)容的新版（2007年版）、并加入了個(gè)人注解與詮釋，共六萬(wàn)五千字。國(guó)家藥監(jiān)局新藥審評(píng)中心內(nèi)部刊物《藥品審評(píng)論壇》于2008年第3期刊登了其中的  《仿制藥生物等效性試驗(yàn)指導(dǎo)原則》。 “采用延遲時(shí)間校正溶出曲線的具體實(shí)例”屆時(shí)請(qǐng)?jiān)斠姟斗轮扑幧锏刃栽囼?yàn)指導(dǎo)原則——疑難解答》部分。

（2）在溶出試驗(yàn)時(shí)，配制難溶性藥物對(duì)照品溶解，先用有機(jī)溶劑溶解，然后用其它介質(zhì)定容，是不是只用目測(cè)不混濁等就認(rèn)為*溶解呢？

謝老師：

是的。肉眼觀察，輕微振搖時(shí)無(wú)任何固體顆粒懸浮、即可。建議勿采用“有機(jī)溶劑溶解，再用溶出介質(zhì)定容”的方式。而是采用：有機(jī)溶劑溶解并配制成一個(gè)高濃度的濃溶液在一容量瓶?jī)?nèi)，隨后精密量取適量分別用多種溶出介質(zhì)稀釋的方式；同時(shí)該濃溶液還可放置在冰箱內(nèi)保存以待其后使用，如此便可做到“事半功倍”！